Клостридиозы свиней: clostridium perfringensтипа a

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1. Голодный агар готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.2. Мясную воду готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.3. Мясо-пептонный агар (бульон) с 0,1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.4. Среду из сухого питательного агара с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.5. Железосульфитная среда: к 1 дм3 дистиллированной воды добавляют 10,0 г триптона, 0,5 г сульфита натрия, 0,5 г железа (III) цитрата, 15,0 г агара (при приготовлении агаризованной среды) или 1,5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Растворяют компоненты при нагревании, после этого смесь охлаждают до (50 ± 5) °С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял (7,1 ± 0,1) (в пересчете на (25 ± 1) °С). Среду разливают в пробирки по 10—12 см3 или колбы и стерилизуют при (121 ± 1) °С в течение 15 мин.

Триптон может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина, а триптон и 1 дм3 воды могут быть заменены на 1 дм3 мясной воды, приготовленной по и. 3.2.2.

3.2.6. Триптозо-сульфит-циклосериновый агар готовят по ГОСТ 10444.9.

3.2.7. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда: в 800 см3 воды вносят 10,0 г пептона, 1,5 г дрожжевого экстракта или 7,5 см3 дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1,

5.0 г уксуснокислого натрия. Отдельно 1,0 г растворимого крахмала вносят в небольшую порцию воды и при непрерывном помешивании переносят в кипящую воду, доводя объем до 200 см3 и получая крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см3 смеси, содержащей остальные компоненты, добавляют 15,0 г агара при приготовлении плотной среды или 1,5 г агара при приготовлении вязкой среды и кипятят 30 мин. Доводят объем среды до 1 дм3, добавляют 1,0 г глюкозы и 0,5 г Z-цистеина гидрохлорида, охлаждают среду до (50 ± 5) °С. Устанавливают pH таким образом, чтобы он составлял (7,1 ± 0,1) (в пересчете на (25 ± 1) °С). Среду разливают мерно в колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 15 мин. Перед использованием к 100 см3 среды добавляют 0,4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по и. 3.1.5, и 2 см3 раствора железа (III) цитрата, приготовленного по и. 3.1.7. При необходимости среду разливают в пробирки по 10—12 см3.

3.2.8. Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов: к 1 дм3 стерильного, расплавленного и охлажденного до (80 ± 1) °С мясо-пептонного агара, приготовленного по и. 3.2.3, или среды, приготовленной по и. 3.2.4, добавляют 10 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по и. 3.1.5, и 1 см3 раствора аммония железа (III) сульфата, приготовленного по и. 3.1.2. Среду хранят в защищенном от света месте при (6 ± 2) °С не более 7 сут.

Допускается заменять раствор аммония железа (III) сульфата раствором железа (III) аммония цитрата или раствором сульфата железа (FeS0₄-5H₂0), или раствором железа (III) цитрата, при этом также используют растворы концентрацией 50 г/дм3.

Если использовать раствор сульфата железа, приготовленный по и. 3.1.1, то на 1 дм3 среды его добавляют 0,4 см3.

3.2.8.1. Среда Вильсон-Блера (вязкая), измененная для анаэробов: к 1 дм3 мясо-пептонного бульона с 0,1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом, приготовленным по и. 3.2.3, добавляют 1,5 г агара. Нагревают до расплавления агара, затем охлаждают до (50 ± 5) °С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он соответствовал (7,1 ± 0,1) (в пересчете на (25 ±1) °С). Среду разливают мерно в колбы и стерилизуют при (121 ±1) °С в течение 20 мин, затем к среде добавляют растворы, указанные в и. 3.2.8, для определения сульфитредуцирующей способности.

3.2.8.2. При приготовлении среды Вильсон-Блера агаризованной или вязкой допускается вместо растворов, указанных в и. 3.2.7, использовать на 100 см3 среды для определения сульфитредуцирующей способности 4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по и. 3.1.5, и 1 см3 раствора железа треххлористого, приготовленного по и. 3.1.4. В этом случае готовая среда не подлежит хранению.

3.2.9. Среду Китт-Тароцци без добавления агара, вазелинового масла готовят по ГОСТ 10444.1.

7 Отбор проб

Отбор проб — по нормативным документам стран, принявших стандарт.

Важно, чтобы в лабораторию поступала представительная проба, которая не была повреждена или изменена при транспортировке или хранении. Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте

8 случае отсутствия конкретного стандарта на отбор проб продукта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по процедуре отбора проб

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. 8 случае отсутствия конкретного стандарта на отбор проб продукта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по процедуре отбора проб.

11 В зависимости от копирующих свойств агара.

Осложнения инфекций

Без своевременного лечения токсины, выделяемые клостридиями, поражают кишечную стенку, вызывая появление на ней язв и эрозий. Проникая в кровяное русло, они оказывают некротическое действие, приводя к дистрофическим и функциональным изменениям внутренних органов.

Другие последствия:

• Диарея, возникающая при клостридиозах, быстро обезвоживает организм, усиливая нагрузку на сердечно-сосудистую и мочевыделительную систему.
• Зарегистрированы случаи острого простатита, первопричиной которого послужили клостридии.
• Без лечения происходит скопление в организме большого количества токсинов, приводящих к  клостридиальному сепсису.
• Поражение мочеполовой системы. В некоторых случаях клостридии могут быть первопричиной острого простатита.

Общие причины заражения инфекциями, вызванными клостридиями

Источником инфекции может быть больной и носитель как человек, так и животное, с испражнениями которого клостридии попадают в почву, на дно водоемов, где могут сохраняться несколько месяцев. Механизмы заражения – алиментарный (пищевой), контактно-бытовой. В зависимости от вида клостридий и симптомов болезни заражение здорового человека происходит через определенные факторы передачи. Факторами передачи пищевого пути служат пищевые продукты (мясные продукты, фрукты и овощи, молоко и молочные продукты), для ряда болезней, как ботулизм например, это продукты с созданием анаэробных условий без предварительной термической обработки (консервы, соления, копчености, вяленые продукты, колбасы домашнего приготовления). Контактно-бытовой механизм реализуется через раневой путь инфицирования, когда споры клостридий определенных видов попадают на поврежденные кожные покровы. Также описаны случаи болезней новорожденных (в условиях нарушения правил стерильности), что бывает при столбняке, ботулизме и других клостридиозах.

ссылки

1. Бактерии с низким содержанием GC и грамположительными. Получено из: микро. Cornell.edu
2. Clostridium tetani. Получено из: microbewiki
3. Clostridium tetani. Национальный институт безопасности и гигиены труда. Получено с: insht.es
4. Montecucco, C. and Schiavo, G. (1994). Механизм действия нейротоксинов столбняка и ботулина. Молекулярная микробиология. 13. 1-8
5. Риос М., Гарсия А., Алвес Е., Бреа Р. и Нуньес Дж. (2016). Заражение Clostridium tetaniподозреваю, что это диагностирует. Клиническая Галисия 77 (4). 175-176
6. Smietanska, K., Chudziak, R. and Rastawicki, W. (2013). [Характеристики Clostridium tetani и лабораторная диагностика столбняка. Med Dows Микробиол. 65 (4). 285-295
7. Столбняк. Получено с: mayoclinic.org

Эпидемиология

Сульфитредуцирующие клостридии с фекалиями больного человека или бактерионосителя попадают во внешнюю среду и довольно долго сохраняют свою биологическую активность в почве. Для клостридиозов характерна осенне-летняя сезонность, спорадическая и вспышечная заболеваемость. Восприимчивы к клостридиозам представители различных возрастных группах, но в наибольшей степени — дети.

Механизмы распространения инфекции – фекально-оральный и контактно-бытовой, которые реализуются пищевым и контактным путями.

• Инфекция передается алиментарным путем через пищевые продукты – мясо, фрукты и овощи, молоко. Для ботулизма это продукты с малым содержанием кислорода – консервы, соленья, копченая, вяленая рыба и колбаса, приготовленные дома.
• Контактный путь — передача возбудителя через инфицированные предметы окружающей среды и грязные руки.

Под воздействием токсинов в тонком кишечнике нарушается транспорт глюкозы, поражается эпителий, слизистая становится гиперемированной, отечной, на ней появляются геморрагии, язвы и очаги некроза. Токсины оказывают капилляротоксическое действие, что приводит к дистрофическим и некробиотическим процессам во внутренних органах.

Активация собственной микрофлоры человека может стать причиной клостридиоза. После лечения антибиотиками или цитостатиками размножение клостридий усиливается.

Факторы, способствующие развитию клостридиозной инфекции:

1. Напряженная экологическая обстановка,
2. Стрессы,
3. Длительная гормональная и антибактериальная терапия,
4. Иммунодефицит,
5. Недоношенность,
6. Дисфункции ЦНС,
7. Хроническая бессонница,
8. Внутрибольничные инфекции,
9. Респираторные инфекции,
10. Операции.

ссылки

1. Биохимический тест и идентификация Clostridium difficile. Получено с: microbiologyinfo.com
2. Чу М., Маллози М., Роксас Б., Бертоло Л., Монтейру М., Вишванатан В. и Ведантам Г. (2016). Clostridium difficile Гликополимерный локус клеточной стенки влияет на бактериальную форму, выработку полисахаридов и вирулентность. PLOS патогены. 12 (10).
3. Clostridium difficile. Получено с: microbewiki.com
4. Гарза Р. Основные факторы вирулентности Clostridium difficile и роль этого микроорганизма при псевдомембранозном колите. Взято из: amyd.quimica.unam.mx
5. Заражение Clostridium difficile. Взято с сайта: mayoclinic.org
6. Институт общественного здравоохранения Чили (2012). Clostridium difficile. Взято из: cl
7. Кирк Дж., Банерджи О. и Фаган Р. (2017). Характеристики Clostridium difficile клеточная оболочка и ее значение в терапии. Микробная биотехнология. 10 (1) 76-90
8. Мейер Л., Эспиноза Р. и Кера Р. (2014, май). Заражение Clostridium difficile: эпидемиология, диагностика и терапевтические стратегии. Медицинский журнал Los Condes Clinic. 25 (3). 473-484

Общие характеристики

Это грамположительно

Clostridium difficile оно становится фиолетовым, когда подвергается окраске по Граму. Это указывает на то, что его клеточная стенка содержит пептидогликан, который по своей структуре удерживает молекулы красителя, заставляя его принимать вышеупомянутый цвет.

Производит споры

Эта бактерия производит споры, когда условия окружающей среды неблагоприятны. Эти споры могут выживать в течение примерно двух лет в неблагоприятных условиях. Как только они изменяются и становятся благоприятными, споры прорастают, образуя новые клетки бактерии..

метаболизм

Clostridium difficile Он представляет собой метаболизм, основанный главным образом на ферментации некоторых сахаров, среди которых основным является глюкоза. Он также сбраживает фруктозу, маннит, маннозу и целлобиозу..

среда обитания

Эта бактерия вездесуща. Он присутствует в нормальной микробиоте желудочно-кишечного тракта человека в виде комменсала. Это также найдено в почве, песке и сене. Он также был выделен у сельскохозяйственных животных, грызунов и домашних животных, таких как собаки и кошки..

Это патогенное

Clostridium difficile Он считается патогенным агентом, поскольку через споры способен генерировать определенные патологии. У этого есть предпочтение для желудочно-кишечного тракта, где это прорастает и вызывает болезни, такие как псевдомембранозный колит.

Условия роста

Эта бактерия может развиваться в различных условиях роста. Допустимый диапазон температур составляет от 25 до 45 ° С. Его оптимальная температура составляет 30-37 ° С.

Производит токсины

Бактерия производит два токсина, A и B. Оба токсина действуют на уровне эпителиальных клеток кишечника, вызывая серию изменений, которые приводят к развитию патологий, таких как диарея, связанная с Clostridium difficile, псевдомембранозный колит и диарея, связанные с антибиотиками.

Это отрицательная каталаза

Эта бактерия не способна синтезировать фермент каталазы. Это приводит к тому, что он не может развернуть перекись водорода (H₂О₂) в воде и кислороде.

Гидролизовать желатин

Clostridium difficile синтезирует ферменты желатиназы, которые позволяют ему вызывать разжижение желатина. Об этом свидетельствуют посевы, в которых вокруг колоний наблюдается прозрачный ореол..

Это отрицательный индол

Эта бактерия не синтезирует группу ферментов, известных как триптофаны. Из-за этого он не способен разрушить индол молекулы аминокислоты триптофан. Это тест, который дифференцирует Clostridium difficile других бактерий и даже других рода Clostridium.

Это негативная уреаза

Бактерия способна гидролизовать мочевину до диоксида углерода и аммиака. Это потому, что он не синтезирует фермент уреазы, так как у него нет генов для этого.

Не уменьшает нитраты

Clostridium difficile Он не синтезирует фермент нитратредуктазу, поэтому он не может восстанавливать нитраты до нитритов. Это также представляет собой тест на выявление и дифференциацию бактерий.

Клостридии

Клостридии — факультативные анаэробы (бактерии растут и размножаются при отсутствии доступа кислорода). Являются сапрофитами. Освобождают природу от мертвого органического материала через процессы брожения и гниения. Они присутствуют в кишечнике животных и человека, где питаются органическими остатками, но не инвазируют (проникают) в живые здоровые ткани.

Клостридии — это бактерии палочковидной формы (бациллы), продуцирующие целый ряд токсинов и ферментов, образующие при неблагоприятных условиях споры. Патогенные формы возбудителей вызывают такие грозные заболевания, как столбняк, ботулизм и газовую гангрену. Они вырабатывают самые сильные из известных ядов — тетаноспазмин (Clostridium tetani), ботулотоксин (Clostridium botulinum) и а-токсин (Clostridium perfringens).

Основными возбудителями газовой гангрены являются Clostridium perfringens (70 — 80% случаев), Clostridium novyi (20 — 43%) и Clostridium septicum (5 — 18%). Значительно реже встречаются такие виды клостридий, как Clostridium histolyticum, Clostridium sordellii, Clostridium difficile, Clostridium fallax и др.

Газовая гангрена практически всегда является смешанной инфекцией. Часто при инфицировании к клостридиям присоединяются аэробные микроорганизмы: стрептококки, стафилококки, кишечная палочка, протей и др.

Таксономия клостридий

Возбудители газовой гангрены относятся к семейству Bacillaceae, роду Clostridium. К роду Clostridium относятся многочисленные (около 80) видов клостридий.

Морфология

Возбудитель газовой гангрены — грамположительная палочка. Бактерии обычно подвижны, имеют капсулу. некоторые виды клостридий лишены капсулы, но имеют жгутики. Самая большая по размеру из всех клостридий является С. novyi. Все остальные бактерии значительно меньших размеров.

Рис. 3. Возбудители газовой гангрены Clostridium perfringens (мазок чистой культуры) под микроскопом.

Спорообразование клостридий

Клостридии при неблагоприятных условиях образуют споры, расположенные центрально или субтерминально. При центральном расположении спор палочка становится похожей на веретено (closter — веретено).

Споры клостридий устойчивы к высушиванию, высокой температуре и солнечному свету. Они способны выживать в солевых растворах, переносить длительное кипячение, промораживание, ультрафиолетовое облучение, радиацию и вакуум. Споры проявляют устойчивость к целому ряду токсических и дезинфицирующих веществ.

В спорообразном состоянии бактерии могут находиться сотни лет. При благоприятных условиях внешней среды споры прорастают. Процесс прорастания длится 4 — 5 часов.

Рис. 4. Споры Clostridium perfringens.

Рис. 5. На фото спора клостридии. В ее сердцевине находится покоящаяся вегетативная клетка.

Рис. 6. Деление вегетативной клетки после прорастания споры.

Биохимические свойства и токсины клостридий

Возбудители газовой гангрены ферментируют углеводы с образованием газа и кислоты, образуют сложные экзотоксины — 12 ферментов (токсинов) и энтеротоксин, вызывающий воспаление кишечника. Бактерии делятся на шесть сероваров (А, В, С, D, E, F), каждый из которых имеет свои некротические характеристики. Серовар А является основным возбудителем газовой гангрены. Он формирует до 90% всех случаев заболевания. Основные мишени для токсинов являются мембраны клеток. Ферменты способствуют их расщеплению с последующим за этим отеком и аутолизом (саморастворением).

Бактерии типов А и С выделяют энтеротоксины, являющихся причиной пищевых токсикоинфекций и некротического энтерита.

Особенности заболеваний, вызываемых клостридиями

Главным отличительным признаком всех клостридиозов является четкая выраженность некротических и токсических факторов, преобладающих над воспалительными процессами. Поэтому характерными симптомами заболеваний данной группы являются отеки, некротические поражения и газообразование в тканях.

Псевдомембранозный колит

Появление псевдомембранозного колита, возбудителем которого является Cl. difficile, часто регистрируется в условиях стационара клиник или после прохождения длительного курса антибиотикотерапии. Это объясняется тем, что клостридии невосприимчивы к большинству антимикробных препаратов и дезинфицирующих средств, губительно действующих на другие микроорганизмы. На фоне снижения количества здоровой микрофлоры и развиваются энтероколиты, вызванные Clostridium difficile. Они проявляются такими симптомами:

• сильная диарея с примесью в кале слизи;
• повышение температуры тела;
• тошнота и рвота;
• боли в области живота;
• повышенная утомляемость;
• головные боли.

Легкая форма заболевания проходит сразу после прекращения приема антибиотика. При переходе в тяжелую форму наступает:

• обезвоживание;
• нарушение кровообращения;
• появление в кале крови;
• судороги;
• уменьшение общего объема выделяемой мочи.

Осложнением псевдомембранозного колита является разрыв кишечника с последующим перитонитом, приводящим к летальному исходу.

Особенность патологии заключается в рецидивах, проявляющихся спустя 3-27 дней после выздоровления.

Ботулизм

Наиболее опасной инфекцией является ботулизм, так как ботулотоксины, продуцируемые Cl. botulinum, сильнее, чем у других клостридий. Попадая в пищеварительный тракт человека с продуктами питания, эти яды быстро всасываются в кровь, вызывают тяжелые поражения нервной системы, заканчивающиеся без лечения параличом дыхательного центра и смертью.

Столбняк

Cl. tetani вырабатывает столбнячный токсин, вызывающий тонические мышечные сокращения. Помимо этого, на фоне основной болезни клостридия провоцирует разрывы связок, сухожилий и мышц, переломы костей, отек легких и пневмонию.

Особенностью столбнячного клостридиоза у детей грудного возраста является способность бациллы выделять экзотоксины в пищеварительном тракте и провоцировать клинические признаки ботулизма. В организме ребенка после года микроорганизм утрачивает это свойство.

Газовая гангрена

Инфекция, поражающая кожу. Очень часто развивается после травм, ранений, ампутаций. Гангрена представляет собой пораженный, мёртвый участок кожи, который постепенно захватывает здоровые места.

К клостридиям газовой гангрены относятся Clostridium perfringens, Cl. novyi, Cl. septicum и некоторые другие штаммы бактерий. Для заболевания характерна высокая скорость развития, при которой уже через 6 часов после заражения появляются клинические признаки. К ним относятся:

• лихорадка;
• посинение кожного покрова в области проникновения бацилл;
• болезненность и отечность раневых краев;
• выделение при надавливании из раны пузырьков газа с неприятным гнилостным запахом;
• крепитация пораженного участка при пальпации.

Медики выделяют четыре специфических симптома газовой гангрены:

1. Симптом Мельникова. Лигатура, наложенная на инфицированную конечность, через четверть часа сильно впивается в кожу из-за быстрого увеличения объема тканей.
2. Симптом шпателя. При нанесении легких ударов металлическим шпателем слышен тимпанический хрустящий звук.
3. Симптом пробки шампанского. Извлечение тампона из раны сопровождается хлопком.
4. Симптом Краузе. Скопления пузырьков газа между мышечными волокнами на рентгеновском снимке имеют форму «елочек».

6 Оборудование и лабораторная посуда

Приемлемой альтернативой посуды многоразового применения является одноразовая посуда, если она отвечает соответствующим требованиям. Одноразовая посуда предпочтительнее многоразовой.

Применяют микробиологическое лабораторное оборудование по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ 10444.1.

6.1 Оборудование для сухой стерилизации (сушильный шкаф), обеспечивающий поддержание температуры в пределах от 160 до 180 °С или стерилизации насыщенным паром (автоклавы).

6.2 Гомогенизатор, смеситель или миксер для подготовки проб не жидких продуктов (см. ГОСТ ISO 7218);

6.3 Баня водяная, обеспечивающая работу при температуре 44 °С — 47 °С с максимально допустимым отклонением температуры ±0,5 °С.

6.4 Анаэробный сосуд (анаэростат), с устройством для создания анаэробной атмосферы.

6.5 Инкубатор (термостат), поддерживающий температуру (37 ± 1) °С и, если необходимо, (50 ±1) °С.

6.6 Пробирки размером 16 мм × 160 мм и колбы или флаконы вместимостью 500 см3.

6.7 pH-метр, обеспечивающий измерение с точностью ±0,05 единиц pH, с разрешением 0,01 единицы pH;

6.8 Чашки Петри, стеклянные или пластмассовые диаметром от 90 до 100 мм или, если необходимо, 140 мм;

6.9 Пипетки, градуированные для бактериологического применения, номинальной вместимостью 10 см3, 2 см3 и 1 см3, с ценой деления 0,5 и 0,1 см3, и с выходным отверстием с номинальным диаметром от 2 до 3 мм.

6.10 Бактериологическая петля из платиноиридиевого или никель-хромового сплава диаметром около 3 мм.

6.11 Микроскоп оптический, обеспечивающий увеличение 1000× при просмотре в проходящем свете, оснащенный устройством для фазово-контрастной микроскопии.

Лечение

Консервативные методы лечения при клостридиозах у взрослых и детей включают мероприятия, позволяющие остановить размножение клостридий и выделение ими токсических веществ:

1. Введение специфических сывороток и иммуноглобулинов, которое должно проводиться под строгим контролем врача в условиях стационара. Неверная дозировка средства может привести к анафилактическому шоку.
2. Антибактериальная терапия, включающая в себя антибиотики, оказывающие губительное действие на клостридий (Метронидазол, Нифуроксазид, Тинидазол, Левофлоксацин и другие). При клостридиозах также эффективны Доксициклин и Ванкомицин. Антибиотики, использовашиеся ранее для лечения другой инфекции и вызвавшие дисбактериоз, отменяются. В оптимальном варианте, прежде чем лечить клостридиозы, врач должен провести тест на чувствительность клостридий к определенным антибиотикам. Но молниеносность данных болезней часто не позволяет это сделать.

Симптоматическое лечение включает применение:

• жаропонижающих, противовоспалительных и заживляющих средств;
• пробиотиков;
• гепатопротекторов;
• уросептиков.

Обязательно назначаются внутривенные инъекции препаратов, предотвращающих обезвоживание и снимающих интоксикацию.

симптомы

Среди наиболее важных симптомов кишечной патологии, вызванной Clostridium difficile Вы можете упомянуть:

• лихорадка
• Водный понос
• Боль в животе
• тошнит
• анорексия
• Вздутие живота
• обезвоживание
• Общее недомогание

На уровне кишечного эпителия можно увидеть определенные поражения, которые указывают на развитие заболевания:

• Ранняя травма (Тип I): здесь наблюдается эпителиальный некроз, при котором в толстой кишке имеются экссудаты и нейтрофилы.
• Травма II типа: это эпителиальное изъязвление (тип вулкана), в середине интактной слизистой оболочки.
• Травма III типа: здесь изъязвление покрыто своего рода мембраной, которая состоит из клеточного дебриса и лейкоцитов.

Общие характеристики

Это грамположительный

Clostridium tetani Это бактерия, которая входит в группу грамположительных. Это благодаря толстому слою пептидогикано, соединения, которое улавливает молекулы красителя и удерживает их. Из-за этого бактериальные клетки приобретают фиолетовый цвет, характерный для этого типа бактерий.

Форма эндоспор

Споры, продуцируемые Clostridium tetani Они растут на терминальном конце бактерий, а их диаметр превышает ширину бактерий. Эти споры очень устойчивы к нагреванию. Они могут оставаться в земле в состоянии покоя в течение примерно 40 лет, сохраняя свои инфекционные возможности.

Это строгий анаэроб

Эта бактерия не нуждается в кислороде ни для одного из своих метаболических процессов, поскольку она может использовать другие типы элементов или соединений. Этот элемент токсичен для бактерий. Развивается только при полном отсутствии этого химического элемента.

Условия роста

Среди требований, предъявляемых к этой бактерии для развития и роста, средняя температура 37 ° C, а также приблизительный уровень pH от 7 до 7,5. В дополнение к этому вам нужно много аминокислот и витаминов.

Производят экзотоксин

Clostridium tetani производит нейротоксин, известный как тетаностеамин. Этот токсин представляет собой пептид, который действует на уровне основных клеток нервной системы, нейронов, предотвращая высвобождение некоторых нейротрансмиттеров..

Он также производит другой токсин, тетанолизин. Этот токсин все еще изучается, так как его влияние на хозяина еще не выяснено. Ингибируется сывороточным холестерином и кислородом.

Это патогенное

Эта бактерия является признанным патогеном, ответственным за возникновение столбняка у людей. Это заболевание, которое вызывает ряд мышечных спазмов и сильных сокращений, в дополнение к жесткости.

Бактерия заражает организм через попадание в него спор. Внутри споры прорастают и начинают вызывать хаос на уровне вегетативной нервной системы.

среда обитания

Бактерия, как в своей вегетативной форме, так и в спорах, встречается в основном в теплых и влажных местах, а также в желудочно-кишечном тракте и в фекалиях различных животных, таких как лошади, овцы и собаки. Эта бактерия обычно находится в грязных местах.

метаболизм

Clostridium tetani не может сбраживать углеводы Напротив, если вы можете выполнить процесс ферментации нескольких аминокислот, а именно: аспартат, глутамат, гистидин и фениаланин.

Это позитивный индол

Clostridium tetani синтезирует группу ферментов, известных как триптофаны. Эти ферменты действуют на аминокислоту триптофан и расщепляют индольную группу, которая является частью ее структуры. Вот почему Clostridium tetani Это классифицируется как положительный индол. Это служит для дифференциации его от других бактерий.

Это отрицательный каталаза

Эта бактерия не синтезирует фермент каталазы, поэтому она не может вызвать расщепление молекулы перекиси водорода (H2O2) в воде и кислороде. Это важная характеристика, которая на лабораторном уровне служит для выявления и дифференциации бактерий..

Гидролизует желатин

Бактерия способна синтезировать ферменты, известные как желатиназы. Эта группа ферментов вызывает ожижение желатина. Когда эта бактерия находится в культуре, вокруг нее виден прозрачный ореол. Это однозначный признак того, что произошел гидролиз желатина.

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1. Результаты испытания оценивают по каждой пробе отдельно.

5.2. Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств обнаружены сульфитредуцирующие грамположительные, каталазоотрицательные, способные расти в анаэробных условиях микроорганизмы, то дают заключение о том, что эти микроорганизмы относятся к сульфитредуцирующим клостридиям.

5.3. Если при подтверждении характерных колоний в 80% случаев, то есть не менее чем в 4 из 5 колоний подтвержден рост сульфитредуцирующих клостридий, то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашке Петри (см. п.4.5), принадлежат к этой группе. В остальных случаях количество сульфитредуцирующих клостридий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

5.4. При определении НВЧ или при определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий в определенной навеске продукта посевы в вязкие среды считают положительными, если при последующем пересеве и подтверждении характерных колоний хотя бы в одной колонии будут обнаружены сульфитредуцирующие клостридии.

5.5. Пересчет количества сульфитредуцирующих клостридий на 1 г (см) продукта проводят по ГОСТ 26670.

5.6. НВЧ сульфитредуцирующих клостридий в 1 г (см) продукта определяют по количеству положительных пробирок, пользуясь таблицей, приведенной в ГОСТ 29184.

5.7. Результаты определения количества сульфитредуцирующих клостридий записывают по ГОСТ 26670.

5.8. Результаты выявления присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий с указанием навески продукта записывают следующим образом: сульфитредуцирующие клостридии обнаружены (или не обнаружены).

РОССТАНДАРТ
ФA по техническому регулированию и метрологии
НОВЫЕ НАЦИОНАЛЬНЫЕ СТАНДАРТЫ
www.protect.gost.ru
ФГУП СТАНДАРТИНФОРМ
предоставление информации из БД «Продукция России»
www.gostinfo.ru
ФА ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ
Информационная система «Опасные товары»
www.sinatra-gost.ru

4.1. Определение количества сульфитредуцирующих клостридий

4.1.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить в 1 г (см3) предполагаемое количество сульфитредуцирующих клостридий или их количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный продукт.

4.1.2. При определении количества спор сульфитредуцирующих клостридий навеску продукта или его исходное разведение перед посевом или приготовлением десятикратных разведений прогревают при температуре (80 ± 1) °С в течение 20 мин. Для прогрева 50 см3 исходного разведения или жидкого продукта помещают в стерильную колбу вместимостью 100 см3 таким образом, чтобы анализируемая проба не размазывалась по стенкам колбы.

Колбу с продуктом или его исходным разведением помещают в предварительно нагретую до (80 ± 1) °С водяную баню. При этом уровень находящейся в колбе пробы должен быть на 2—3 см ниже, чем уровень воды в бане. Одновременно в водяную баню помещают контрольную колбу, содержащую 50 см3 исходного разведения или продукта, и термометр.

Время термообработки начинают отсчитывать с того момента, когда содержащееся в колбе исходное разведение или продукт достигнут указанной температуры. После термообработки колбу немедленно охлаждают под струей водопроводной воды.

4.1.3. При определении количества сульфитредуцирующих клостридий по методу НВЧ высевают три последовательных навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся друг от друга по количеству высеваемого продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) его разведение высевают в пробирки с одной из вязких питательных сред, приготовленных по и. 3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8.1, или 3.2.8.2. Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения к питательной среде 1:9.

4.1.4. При определении количества сульфитредуцирующих клостридий методом посева в ага-ризованные среды по 1 см3 навески продукта или его разведения вносят в две чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 одной из агаризованных сред, приготовленных по и. 3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8, или 3.2.8.2, или 3.2.6.

После затвердения среды в чашки Петри для образования второго слоя вливают еще 10 см3 голодного агара.